Base

Peptone  2 g

NaCl  5 g

K2HPO4 0,3 g

Bromthymol blue  0,03 g

Agar  2,5 g

Aquadest  1 liter

Larutkan bahan dalam aquadest lalu panaskan dengan hot plate stirer hingga mendidih. Pipet sebanyak 2,7 ml agar cair lalu masukkan dalam tabung 13 mm x 100 mm. Sterilisasi dengan autoclave pada suhu 121oC selama 15 menit. pH akhir 7,1.

Larutan stock karbohidrat

Larutkan 10 g karbohidrat dalam 90 ml aquadest. Sterilisasi dengan menggunakan membrane filter 0,22 um.

Tambahkan 0,3 ml larutan stock karbohidrat kedalam 2,7 ml base dalam tabung. Kocok agar karbohidarat tercampur sempurna pada suhu ruang. Buat tabung yang sama secara duplo, salah satu tabung dilapisi dengan mineral (paraffin) oil steril. Inkubasi pada suhu 35oC selama 48 jam.