Hucker’s Crystal Violet

Larutan A

Crystal violet                       2 g

Ethyl alcohol, 95 %          20 ml

Larutan B

Ammonium oxalat                     0,8 g

Aquades                                          80 ml

Campur larutan A dan B. Simpan selama 24 jam dan saring dengan kertas saring.

 

Gram’s Iodine

Iodine                                            1 g

Potassium iodine                      2 g

Aquades                                    300 ml

Masukkan KJ dalam mortar, tambahkan iodine dan gerus dengan alat penggiling selama 5 – 10 detik. Tambahkan 1 ml air dan gerus kemudian tambahkan 5 ml. Tambahkan lagi 10 ml dan gerus. Tuang larutan ini dalam botol pereaksi. Bilas mortar dan alat penggilingnya dan tambahkan air hingga volume 300 ml.

Hucker’s counterstain (larutan stock)

Safranin O                                 2,5 g

Ethanol, 95 %                          100 ml

Larutan kerja : larutkan 10 ml larutan stok kedalam 90 ml aquades.

 

Prosedur Pewarnaan Gram

Buat usapan bakteri yang akan diwarnai diatas gelas preparat. Usahakan usapan yang dibuat setipis mungkin. Fiksasi gelas preparat tersebut dengan melewatkan melalui api burner. Warna film selama 1 menit dengan larutan hucker’s crystal violet dan cuci sebentar dengan air. Bubuhkan larutan gram iodine selama 1 menit. Cuci dengan air mengalir. Lakukan dekolorasi (penghilangan warna) dengan ethanol 95 % hingga seluruh warna biru hilang (kira-kira 30 detik). Cuci kembali dengan air mengalir. Bubuhkan larutan hucker’s counterstain (safranin) selama 1 menit dan cuci kembali dengan air mengalir, keringkan dan periksa di bawah mikroskop.